Oligo သန့်စင်မှုအတွက် သန့်စင်ရေးကိရိယာ

1. Gel Electrophoresis Chromatography သန့်စင်ခြင်း။
သန့်စင်ရန်အတွက် polyacrylamide gel electrophoresis chromatography ကိုသုံးပါ။denaturing agent သည် ယေဘူယျအားဖြင့် 4M formamide သို့မဟုတ် 7M urea ဖြစ်သည်၊ acrylamide ၏ပါဝင်မှုသည် 5-15% အကြားဖြစ်ပြီး methacrylamide ၏အချိုးအစားမှာ အဓိကအားဖြင့် 2-10% ကြားဖြစ်သည်။
electrophoresis ပြီးနောက် nucleic acid band ၏ အနေအထားကို ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည် ဖြာထွက်မှုအောက်တွင် သတ်မှတ်ရန် လိုအပ်ပြီး၊ ပစ်မှတ် nucleic acid ပါရှိသော ဂျယ်ကို ဖြတ်လိုက်သည်၊ nucleic acid ကို ရိုက်ခွဲကာ ယိုစိမ့်ကာ၊ ထို့နောက် leaching solution သည် စုစည်းကာ ကုန်ဆုံးသွားသည်၊ ပမာဏနှင့် lyophilized ။

2. DMT-On၊ HPLC သန့်စင်ခြင်း။
ပေါင်းစပ်မှုအတွင်း DMT-On မုဒ်ကို ရွေးချယ်ပါ၊ အမိုင်နိုနယ်ခြင်းပြီးနောက် ပိုလျှံနေသော အမိုးနီးယားကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် အစိမ်းလိုက် ထုတ်ကုန်ကို ဗဟိုပြု၍ အခန်းအပူချိန်တွင် စုစည်းထားသည်။
ခွဲထွက်ခြင်းကို acetonitrile နှင့် 10% triethylamine-acetic acid (TEAA) ပါသော C18 ကော်လံကို အသုံးပြု၍ ခွဲထုတ်ခြင်းကို လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။elution ပြီးသွားသောအခါ၊ ၎င်းကိုစုစည်းပြီး DMT အုပ်စုကို trifluoroacetic acid ဖြင့်ဖယ်ရှားသည်။ကြားဖြတ်ပြီးနောက်၊ အချို့သော ဆားများနှင့် သေးငယ်သော မော်လီကျူးများကို ဖြတ်ထားသော ပြွန်မှတဆင့် ဖယ်ရှားပြီး နောက်ဆုံးတွင် ဖယ်ထုတ်ပစ်လိုက်သည်။

ဤနည်းလမ်းသည် မြင့်မားသော သန့်စင်မှုရှိသော ထုတ်ကုန်တစ်ခုကို ရရှိနိုင်သော်လည်း depurination ဖြစ်ပွားမှုကို အာရုံစိုက်ရန် လိုအပ်ပါသည်။

3. DMT-Off၊ HPLC သန့်စင်ခြင်း။
ပေါင်းစပ်စဉ်အတွင်း DMT-Off ကို ရွေးပါ၊ နှင့် အကြမ်းထည်ထုတ်ကုန်ကို အမိုးနီးယားခွဲထုတ်ပြီးနောက် ပိုလျှံနေသော အမိုးနီးယားကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် အခန်းအပူချိန်တွင် အာရုံစူးစိုက်ပြီး စုစည်းထားသည်။
ခွဲထုတ်ခြင်းကို ရေတွင် acetonitrile နှင့် 10% triethylamine-acetic acid ပါသော C18 ကော်လံကို အသုံးပြု၍ ခွဲထုတ်ခြင်းဖြစ်သည်။ခွဲထုတ်ခြင်းပြီးမြောက်ပြီး အရေအတွက်ကို ခွဲထုတ်ပြီးနောက် aliquots များကို lyophilized လုပ်သည်။

ဤနည်းလမ်းသည် ခွဲခြားမှုအခြေအနေများကို ဂရုတစိုက် ချိန်ညှိမှု လိုအပ်ပြီး သန့်စင်သော ပစ်မှတ်မော်လီကျူးများကိုလည်း ရရှိနိုင်သည်။