nucleic acid ပေါင်းစပ်ခြင်းကို အစိုင်အခဲအဆင့် sialic amide triglyceride method ကိုအသုံးပြု၍ DNA ၏ 3′ ၏အဆုံးကို အစိုင်အခဲအဆင့်အလွှာတွင် ခေတ္တပိတ်ထားပြီး လိုချင်သော DNA အပိုင်းအစများကို ပေါင်းစပ်သည်အထိ 3′ မှ 5′ လမ်းကြောင်းတွင် nucleotides ပေါင်းထည့်ပါသည်။ .၎င်းသည် DNA polymerase ၏အသုံးချမှုဖြင့် DNA ပေါင်းစပ်ခြင်းနှင့်ကွဲပြားသည်။
ပထမအခြေစိုက်စခန်း၏ 3′ အဆုံးအား ပေါင်းစပ်စဉ် CPG တွင် ချုပ်နှောင်ထားပြီး နောက်အခြေစိုက်စခန်း၏ 5′-OH အား di-p-tolyl trityl DMT ဖြင့် ကာကွယ်ထားပြီး၊ အရင်းရှိ အမိုင်နိုအုပ်စုကို benzoic acid နှင့် 3′ တို့ဖြင့် ကာကွယ်ထားသည်။ -OH သည် အမိုင်နို ဖော့စဖိတ်ဒြပ်ပေါင်းဖြင့် အသက်သွင်းသည်။1 base ၏ 5 5′-OH ၏ 1 base နှင့် နောက် base ၏ 3′-OH သည် phosphite triglyceride အဖြစ်သို့ အိုင်အိုဒင်းဖြင့် ဖော့စဖိတ် triglyceride သို့ oxidised ဖြစ်ပြီး၊ ဒုတိယ base 5′-OH မှ အကာအကွယ်ကို ဖယ်ရှားလိုက်ပါသည်။ dichloroacetic acid DM ကို ပေါင်းထည့်ခြင်း သည် နောက် base ၏ ထပ်တိုးခြင်း အားဖြင့် လည်ပတ်ပြီး 5′-OH ပေါ်ရှိ ကာကွယ်မှုကို အားနည်းသော အက်ဆစ်ဖြင့် ဖယ်ရှားလိုက်သည် အပိုင်းအစသည် စုစည်းထားသော ammonium ဟိုက်ဒရောဆိုက် ပါ၀င်သော အစိုင်အခဲ အစေးနှင့် အဆက်ပြတ်သွားပြီး၊ အကာအကွယ်ကို base မှ ဖယ်ရှားသည်။ အပူအောက်တွင် စုစည်းထားသော ammonium ဟိုက်ဒရောဆိုက်ဖြင့်၊ အမိုနီယမ်ဟိုက်ဒရောဆိုဒ်ကို ဖယ်ရှားလိုက်သည်၊ အပိုင်းအစသည် ဖုန်စုပ်စက်ခြောက်သွေ့သွားကာ nucleic acid ကို အရည် chromatography သို့မဟုတ် PAGE ဖြင့် သန့်စင်ထားသည်။
Oligo Synthesis ၏ အဆင့်များ
ပိတ်ဆို့ခြင်း
ဟိ5 အဆုံးသတ် DMT ကာကွယ်သည့်အဖွဲ့ကို TCA ဖြေရှင်းချက်ထည့်ခြင်းဖြင့် ဖယ်ရှားသည်။
အသက်သွင်းခြင်း။
တက်ကြွသော oligonucleotide မိုနိုမာ အလယ်အလတ်အဖြစ် ဖွဲ့စည်းရန် activator ကို oligonucleotide monomer နှင့် ရောနှောခြင်း။
အဆက်အစပ်
5-terminal hydroxyl အုပ်စုသည် မတည်ငြိမ်သော ဖော့စဖိုက်ထရစ်ဂlyceride နှောင်ကြိုးကို ဆန့်ကျင်သည့် မျိုးဆက်ပွားငွေ့ရည်ဖွဲ့တုံ့ပြန်မှုတွင် တက်ကြွသော oligonucleotide အလယ်အလတ်နှင့် ဓာတ်ပြုသည်။
အဖုံးအုပ်
capping အေးဂျင့်တစ်ခုထပ်ပေါင်းခြင်းသည် ငွေ့ရည်ဖွဲ့တုံ့ပြန်မှုတွင် မပါဝင်သည့် ပိုလျှံနေသော ဟိုက်ဒရောနစ်အုပ်စုများနှင့် acetylation capping တုံ့ပြန်မှုကို လုပ်ဆောင်သည်။
ဓာတ်တိုးခြင်း။
ရေတွင်ပါဝင်သော အိုင်အိုဒင်းအရည်ကို ထပ်ဖြည့်ခြင်းသည် တည်ငြိမ်သောဖော့စဖရပ်အက်ဆစ်ထရစ်ဂလီစာရိုက်နှောင်ကြိုးများအဖြစ် ဓာတ်တိုးခြင်းဖြင့် မတည်ငြိမ်သောဖော့စဖိုက်အနှောင်အဖွဲ့များနှင့် ဓာတ်ပြုသည်။
Cyanoethyl Cleavage
ပေါင်းစပ်ပြီးနောက် nucleic acid ထုတ်ကုန်သည် ဖော့စဖိတ် triglyceride နှောင်ကြိုးမှ cyanoethyl အုပ်စုကိုဖယ်ရှားရန် DEA ဖြေရှင်းချက်ပေါင်းထည့်ခြင်းဖြင့်၊
ခုတ်ထစ်ပြီး ကာကွယ်မှု
nucleic acid အပိုင်းအစများကို စုစည်းထားသော ammonium hydroxide solution ကို ပေါင်းထည့်ခြင်းဖြင့် bases ၏ ဟိုက်ဒရိုဂျင်နှောင်ကြိုးများမှ အကာအကွယ်အဖွဲ့များကို ဖယ်ရှားရန် အပူပေးခြင်းဖြင့် နျူကလိစ်အက်ဆစ်အပိုင်းအစများကို ခွဲထုတ်သည်။
တင်ချိန်- နိုဝင်ဘာ ၂၁-၂၀၂၂